天下第三 发表于 2005-8-6 02:23:00

简述显微摄影技术

简述显微摄影技术

胡文华 顾达聪 王晓民 彭瑞云 王德文
【文章编号】1684—2030(2oo3)o3一O264—02

目前,在显微镜使用过程中,记录镜下样品图像的重要手段仍然是显微摄影技术,特别是在组织病理学、细胞学等作者单位:100850军事医学科学院放射医学研究所学科的科研工作中,该技术是不可缺少的一种常规技术方法,对从事这方面工作的科研人员来说,显微摄影是必须要掌握的最基本的方法之一。本文以日本Olympus PM一10一AD型全自动显微摄影装置为例,简述显微摄影技术,供有关人员参考。

1 胶卷的选择

显微摄影的胶卷选择,应根据标本的颜色和用途而定。一般情况下,对无色或单色标本,选用ASA 50一100的快速全色黑自胶卷。拍摄暗背景的标本,由于曝光时间长,可选用高感光度的胶卷。照彩色标本,应选用彩色胶卷。但要注意彩色胶卷分为日光型和灯光型两种,一般市售胶卷多为日光型,电影负片多为灯光型。使用时所用光源的色温应与片型相符,如不相符必须加用色温滤色片校正,否则照片偏色。

2 装胶卷

市售带暗盒的胶卷,按普通照相机的装卷方法装入相机内即可,但片头一定要装牢,盖好相机后盖后将片盒内的胶片卷紧,按动“卷片按钮(Tin1e of/Winding)”两次,每次按动时必须见到相机卷片轴转动,如不转动,说明胶卷没有装牢,需要打开相机重新装卷。

3 调整控制台

拍摄前应调整好控制台上的所有旋扭。①Format(画幅):调到“35”的位置,指拍摄用的是35mm的照相机。② (感光度):调在与胶卷感光度相对应的位置,如所用胶卷为ASA 100,应将指针调在“100”处。③Reciprocity(胶卷倒易律失效补偿钮):调节不同类型胶卷的倒易律失效补偿指数(见控制台底座下的卡片),通常置于⋯4’。④E)【p0sm ADJ(曝光调节钮):调节曝光补偿指数,应根据标本组织所占画面面积的百分比来确定,如果标本分布均匀,无论是平均测光还是点测光,都不需要曝光补偿,通常置于⋯1’,但视野背景太亮或太暗,均需适当增、减曝光量。⑤Mode/Expostwe 腿(曝光模式):通常置于“Auto”(自动)位置。⑥Expos(曝光按钮):按此钮完成曝光。⑦Time of/Winding(卷片按钮):按此钮相机只过卷不曝光。⑧AE lock(曝光锁定钮):锁定曝光时间,按下此钮,指示灯闪发红光,说明进入锁定状态,如不需要锁定时,只要再按一下此钮,又恢复到原来的自动曝光状态。⑨Time rec棚(记忆按钮):按此钮给出上一次的曝光时间。

4 光源的调节

光源调节对显微摄影来说十分重要,因为光源能直接影响标本反差的大小。用过显微镜的人都知道,从灯泡至标本之间,多数显微镜有两个光栏,下边一个称为“视场光栏”,上边一个为“孔径光栏”。视场光栏的作用有两个:一是根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积;二是起着增减影像反差的作用。所以,在调节光源时,要适当收缩视场光栏。如果视场光栏不收缩,照射到标本上的光有反射和不规则的散射,造成影像反差的损失;如果收缩太小,图像的四角将被切去。视场光栏合适的位置应比照射机取景框稍· 265 ·微大一些。孔径光栏安装在聚光镜中,它的作用是使图像的分辨率、反差、景深处在最佳状态。孔径光栏一般调节到物镜孔径的60% ~80%的位置。如40×物镜上写有“0.65”字样,则将光栏置于0.4 0.5的位置,聚光器的位置一般升到最高处(以视场光栏黑边清晰为准),如用低倍物镜(4×、10×)可适当降低聚光器。

5 滤色片的使用

黑自摄影时,为使不同颜色的标本有不同的反差,必须加用滤色片。加用滤色片的原则是凡要减弱某处颜色,就加与该颜色相同的滤色片;凡要加强某种颜色,就用与该颜色相反(相补)颜色的滤色片。需要加强的颜色 应加滤色片的颜色红— — 青绿一蓝一品红品红黄蓝(品+青)绿(黄+青)青— — 红(黄+品)例如:用H、E染色的标本,胞浆为品红色,胞核为蓝色,为增加反差可加黄绿色滤色片。无颜色的活细胞加用绿色滤色片,能提高照片的反差和清晰度。彩色摄影必须加用“色温”滤色片,使用目光型彩卷加用LBD一2N滤色片。用灯光型彩卷加用LBT—N滤色片。

6 色温调节

黑自摄影不需要调节色温。彩色摄影时,绝不能忽略调节色温。日光型胶卷将色温调至5400K,灯光型胶卷调至3200K。但要注意两点:一是调节色温时将物镜移至没有标本但有盖玻片的位置;二是调节灯泡亮度,以三角形黄色指示灯亮为准。

7 取景与对焦

先从取景目镜中找到需要拍摄的景物,如果视野中的标本组织不适合构图,应调整景物方向,常用的方法是转动

红豆 发表于 2005-8-6 02:37:00

建议学显微外的先去学习摄影~!
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